Ей там! Аз съм доставчик на FMOC - неговият - AIB - OH TFA, и днес искам да говоря как да оптимизирам размера - изключване на хроматография за пречистване на това съединение. Размер - Еклюзионната хроматография, известна още като гел - филтрационна хроматография, е широко използвана техника при пречистването на пептиди като FMOC - His - AIB - OH TFA. Той разделя молекулите въз основа на техния размер, което е супер удобно, когато се опитвате да получите чист продукт.
Първо, нека разберем основите на размера - хроматография за изключване. Стационарната фаза в тази хроматография е съставена от порести мъниста. По -малките молекули могат да влязат в тези пори, докато по -големите не могат. В резултат на това по -големите молекули преминават през колоната по -бързо, а по -малките отнемат повече време, за да се елуират. Тази разлика във времето на елуиране ни позволява да отделяме различни - размери молекули.
Когато става въпрос за пречистване на FMOC - His - AIB - OH TFA, има няколко фактора, които трябва да вземем предвид, за да оптимизираме процеса.
1. Избор на колона
Изборът на колона е от решаващо значение. Трябва да изберете колона с правилния размер на порите. Ако порите са твърде големи, молекулите на FMOC - His - AIB - OH TFA могат да влязат в тях, което ще забави елуирането им и ще повлияе на ефективността на разделяне. От друга страна, ако порите са твърде малки, съединението може да не е в състояние да взаимодейства правилно със стационарната фаза и няма да получите добра раздяла.
Налични са различни видове колони, като тези, изработени от кръстосано свързан декстран, агароза или полиакриламид. Всяка от тях има свои характеристики. Например колоните, базирани на Dextran - са чудесни за разделяне на малки до средни молекули. Те имат сравнително тесен диапазон на разделяне, който може да бъде от полза, когато се занимавате със специфично съединение като fmoc - his - aib - oh tfa.
2. Мобилна фаза
Мобилната фаза е течността, която носи пробата през колоната. Трябва да изберете мобилна фаза, която е съвместима както с пробата, така и със стационарната фаза. За FMOC - His - AIB - OH TFA, често срещаният избор е воден буфер. PH на буфера е важно. Ако рН е твърде високо или твърде ниско, това може да повлияе на заряда на FMOC - His - AIB - OH TFA молекули, което може да промени взаимодействието им със стационарната фаза.
Също така трябва да вземете предвид йонната сила на буфера. Буфер с правилната йонна сила може да помогне за предотвратяване на не -специфични взаимодействия между пробата и колоната. Например, добавянето на малко количество сол към буфера може да намали електростатичните взаимодействия. Но внимавайте да не добавите твърде много сол, тъй като това също може да повлияе на разделянето.
3. Зареждане на проби
Колко проба зареждате върху колоната има много значение. Ако заредите твърде много, колоната може да бъде претоварена. Това може да доведе до лошо разделяне, тъй като молекулите няма да имат достатъчно време, за да взаимодействат правилно със стационарната фаза. От друга страна, ако заредите твърде малко, може да не получите достатъчно от пречистения продукт.
Добро правило е да започнете с малко количество проба и постепенно да увеличите натоварването, докато наблюдавате качеството на разделянето. Можете също да използвате колона преди, за да премахнете всички големи частици или агрегати в пробата, преди да влезе в основната колона. Това може да помогне за защита на основната колона и да се подобри разделянето.
4. Дебит
Дебитът е скоростта, с която подвижната фаза се движи през колоната. Ако дебитът е твърде бърз, молекулите няма да имат достатъчно време за взаимодействие със стационарната фаза и разделянето ще бъде лошо. Ако дебитът е твърде бавен, ще отнеме много време, за да се елуират и може да доведат до разширяване на лентата.
Трябва да намерите оптималния дебит за вашата конкретна колона и проба. Обикновено е добра идея да започнете със сравнително нисък дебит и след това да го регулирате въз основа на резултатите от разделянето. Можете също да използвате контролер на потока, за да поддържате постоянен дебит през целия експеримент.
5. Температура
Температурата също може да повлияе на разделянето по размер - изключване на хроматография. Като цяло, по -високата температура може да повиши скоростта на дифузия на молекулите, което може да подобри разделянето. Въпреки това, трябва да внимавате да не затопляте пробата твърде много, тъй като това може да доведе до разграждане на FMOC - His - AIB - OH TFA.
През повечето време стайната температура е добра отправна точка. Но ако установите, че разделянето не е достатъчно добро, можете да опитате леко да повишите температурата и да видите дали това има значение.
Сега, нека поговорим за някои свързани съединения. Ако се интересувате от други пептидни междинни продукти, ние също доставямеBOC - HIS (TRT) - AIB - OH,Fmc - l - lys - (otb) - glu - (otb - (otb) - да - oee - oeиFmoc - gly - arg (pbf) - о. Тези съединения се използват в синтеза на различни пептиди и могат да бъдат пречистени с помощта на подобни техники за хроматография.
В заключение, оптимизиране на размера - хроматография за изключване за пречистване на FMOC - His - AIB - OH TFA изисква внимателно разглеждане на няколко фактора, включително избор на колони, мобилна фаза, натоварване на пробата, дебит и температура. Чрез фина - настройка на тези параметри можете да постигнете висококачествено разделяне и да получите чист продукт.
Ако сте на пазара за FMOC - неговият - AIB - OH TFA или някое от свързаните съединения, които споменах, не се колебайте да се свържете с преговори за покупка. Винаги сме готови да ви предоставим най -добрите продукти и услуги.
ЛИТЕРАТУРА
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010). Практическо развитие на HPLC метод. John Wiley & Sons.
- Hermanson, GT (2013). Техники за биоконюгит. Академична преса.